(ممکن است هنگام انتقال از فایل اصلی به داخل سایت بعضی متون به هم بریزد یا بعضی نمادها و اشکال درج نشود ولی در فایل دانلودی همه چیز مرتب و کامل است)

فهرست مطالب

عنوان                                                                                                                    صفحه

فصل اول: مقدمه
1
1-1-مقدمه
2
1-2-انجماد
2
1-2-1-تاریخچه ی انجماد
3
1-2-2-تکنیک های مختلف انجمادی
3
1-2-2-1-انجماد آهسته
4
1-2-2-2-انجماد شیشه ای
5
1-2-3-محلول های انجمادی
5
1-2-3-1-ضدیخ ها
5
1-2-3-2-سرم
7
1-2-4-تاثیرات انجماد بر بافت بیضه
7
3- 1-3-پیوند
9
4- 1-4-کشت
10
5- 1-5-تغییرات ملکولی متاثر از انجماد
11
1-5-1-آپوپتوزیس
12
1-5-1-1-مسیر خارجی آپوپتوز و ژن های دخیل در آن
13
1-5-1-2-مسیرداخلی آپوپتوز و ژنهای دخیل در آن
14
1-5-1-3-P53
16
1-5-1-4-کاسپاز 3
17
1-6-هدف
18
1-7-پرسش پژوهشی
18
1-8-فرضیات
18
فصل دوم : مواد و روش ها
19
2-1-تهیه ی بافت بیضه و گروه های مورد مطالعه
20
2-2-انجماد شیشه ای بافت بیضه
21
2-2-1-روش تهیه محیط پایه
21
2-2-2-روش تهیه محلول های انجماد شیشه ای
21
2-2-2-1-روش آماده سازی محلول انجمادی I
21
2-2-2-2-روش آماده سازی محلول انجمادی II
22
2-2-3-مراحل انجماد شیشه ای
22
2-2-3-1-روش انجمادی I
22
2-2-3-2-روش انجمادی II
23
2-2-4-ذوب بافت بیضه
23
2-2-4-1-روش تهیه محلول های ذوب
23
2-2-4-2-مراحل ذوب
23
2-5-مطالعات میکروسکوپی و بافت شناسی بافت بیضه
24
2-6-بررسی آپوپتوز و بقا سلولی
26
2-6-1-هضم مکانیکی و آنزیمی بافت بیضه
26
2-6-1-1-هضم مکانیکی
27
2-6-1-2-هضم آنزیمی
27
2-6-1-3-خنثی سازی اثر آنزیم و بررسی بقا با استفاده از رنگ PI
27
2-6-2-ارزیابی بقای سلولی به روش فلوسایتومتری
28
2-6-3-بررسی آپوپتوز سلولی
29
2 -7-کشت بافت بیضه
30
2-7-1-آماده سازی آگار
30
2-7-2-آماده سازی محیط کشت
31
2-7-2-1-روش تهیه محیط RPMI
31
2-7-3-کشت بافت بیضه
32
2-8-ارزیابی ژن های آپوپتوزی
32
2-8-1-نگهداری بافت در محلول RNA-later
32
2-8-2-استخراج RNA با استفاده از ترایزول
32
2-8-2-1-هموژن کردن بافت2-8-2-2-مرحله ی جداسازی
3333
2-8-2-3-رسوب RNA
33
2-8-2-4-شستشو RNA
33
2-8-3-بررسی کیفی RNA های استخراج شده
34
2-8-4-تیمار نمونه­یRNA  با استفاده از DNase1 جهت حذف آلودگی ژنومی
34
2-8-5-سنتز cDNA
35
2-8-6-پرایمر
37
2-8-6-1-آماده سازی پرایمرها
37
2-8-6-2-بررسی جایگاه اتصال پرایمرها
39
2-8-7-الکتروفورز
39
2-8-7-1-روش ساخت بافر50X TAE
39
2-8-7-2-روش ساخت بافر X TAE1
40
2-8-7-3-طرز تهیه ی ژل آگارز
40
2-8-7-4-بررسی آلودگی پرایمر
40
-8-7-4-بررسی کیفیت RNA
41
2-8-8-بررسی گرادیانت دمایی پرایمر
41
2-8-9 Real-Time PCR
42
2-8-9-2-بررسی کمی بیان ژن با استفاده از روش Real-Time PCR
43 
2-9-آنالیز آماری داده
44
فصل سوم: نتایج
45
3-1-بررسی مورفولوژی بافت بوسیله رنگ آمیزی هماتوکسیلین و ائوزین
46
3-2-مقایسه بقای سلولی در گروه کنترل با گروه های انجمادی I و II بلافاصله پس از ذوب
46
3-3-بررسی میزان وقوع آپوپتوز پس از کشت بافت بیضه
47
3-3-1-ارزیابی میزان بقای سلولی طی کشت بافت بیضه
47
3-3-2-آپوپتوز اولیه ی سلولی طی کشت بافت بیضه
47
3-3-3-بررسی میزان وقوع آپوپتوز پس از کشت بافت بیضه
48
3-3-4-نکروز بافتی طی کشت بافت بیضه
48
3-4-بررسی بیان ژن های آپوپتوزی در سطح رونوشت
49
3-4-1-بررسی بیان رونوشت ژن های دخیل در مسیر های آپوپتوزی
49
3-4-2-Bax
49
3-4-3-BCL2
49
3-4-4-نسبت بیان BAX به BCL2
50
3-4-5-Caspase3
50
3-4-6-Fas
50
3-4-7-Fas Ligand
51
3-4-8-P53
51
27- فصل چهارم: بحث
66
4-1-کلیات
67
4-2-بررسی های مورفولوژیک در ساعات مختلف کشت در گروه های مورد مطالعه
68
4-3-بررسی بقا و آپوپتوز سلولی در گروه های مورد مطالعه
69
4-4-بررسی بیان ژن های مرتبط با وقوع آپوپتوز در گروه های مورد مطالعه
71
4-5-نتیجه گیری
75
4-6-پیشنهادات
76
 

فهرست جداول

عنوان                                                                                                                    صفحه

جدول 2-1-مراحل رنگ آمیزی  هماتوکسیلین ایوزین
26
جدول2-2-مشخصات پرایمرهای مورد استفاده
39
جدول 2-3-برنامه ی مورد استفاده جهت بررسی گرادیانت دمایی پرایمرها
42
جدول 3-1- میانگین بقای سلولی درگروه های کنترل، انجمادی I و انجمادی II
53
جدول3-2- میانگین بقای سلول ها در سه گروه کنترل، انجمادی I و انجمادی II در ساعت های مختلف
53
جدول 3-3- میانگین درصد آپوپتوز اولیه ی سلول ها در سه گروه کنترل، انجمادی I و انجمادی II در ساعت های مختلف کشت
54
جدول 3-4-میانگین درصد آپوپتوز ثانویه ی سلول ها در سه گروه کنترل، انجمادی I و انجمادی II  در ساعت های مختلف کشت
54
جدول 3-5- میانگین درصد سلول های نکروتیک در سه گروه کنترل، انجمادی I و انجمادی II  در ساعت های مختلف کشت
55
جدول 3-6-میزان بیان ژن Bax در سه گروه کنترل، انجمادی I و انجمادی II در ساعت های مختلف کشت
55
جدول 3-7-میزان بیان ژن BCL2 در سه گروه کنترل، انجمادی I و انجمادی II در ساعت های مختلف کشت53
56
جدول3-8-نسبت بیان  BAX به BCL2 در سه گروه کنترل، انجمادی I و انجمادی II در ساعت های مختلف کشت
56
جدول3-9-میزان بیان ژن Caspase3 در سه گروه کنترل، انجمادی I و انجمادی II در ساعت های مختلف کشت
57
جدول 3-10-میزان بیان ژن Fas در سه گروه کنترل، انجمادی I و انجمادی II در ساعت های مختلف کشت
57
جدول 3-11-میزان بیان ژنLigand   Fas در سه گروه کنترل، انجمادی I و انجمادی II در ساعت های مختلف کشت
58
جدول 3-12- میزان بیان ژن P53 در سه گروه کنترل، انجمادی I و انجمادی II در ساعت های مختلف کشت
58
 

فهرست اشکال

عنوان                                                                                                                     صفحه